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求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢?
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求助巢式PCR退火温度的设定
我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢?
我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢?
▼优质解答
答案和解析
可尝试45-70度设个梯度退火,P一次就知道哪个温度最适合.如没有梯度退火的PCR仪,则可试试两个Tm值中间的温度,一般较多在50、55度可P出来.你试试吧.
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