sdspage跑蛋白的菌液处理?（具体见说明,请勿复制）（1）6000rpm离心10min,弃上清（2）加入上样缓冲液orloadingbuffer（两个是一样的?加入多少?）,100摄氏度10min.（3）1000rpm离心2min,上清加样（加

Question

sds page 跑蛋白的菌液处理?（具体见说明,请勿复制）
（1）6000rpm离心10min,弃上清
（2）加入上样缓冲液 or loading buffer（两个是一样的?加入多少?）,100摄氏度 10min.
（3）1000rpm离心2min,上清加样（加多少?0.75mm的板,）,
总结,是不是菌液加的就只有上样缓冲液 or loading buffer?然后一个孔是加maker,多的加上样缓冲液
请勿复制,

Answer 1

marker看你买的是什么样的,有的还是粉末状呢,那个用水溶解后也需要加loading buffer沸水浴处理的.不过现在卖的很多都是那种直接点样的.说明书一般都有说的,一般10微升.
loading buffer就是上样缓冲液的英文.
另外,你的实验步骤里面,你打错了,第三步是10000rpm*2min,我非常肯定这个步骤一定是高速离心.
第一个步骤,我们一般取1ml菌液离心10000rpm*5min吧,具体记得不太清楚了.然后加loading buffer好像是120微升,1倍的,100微升也OK啦,然后沸水浴5到10分钟,然后高速离心,点样.为了避免串样,维持各点样孔之间的那种压力吧,具体怎么说我记不清楚了,反正就是防止别的孔的样品跑到空白泳道,很难看的.所以在空白处也点上1倍的loading buffer
你按照一个固定的数字做下来,点样的时候开始要摸索一下,多点几个样,看看点多少微升合适,因为你的菌液浓度什么的我们也不知道.你要有条件,可以给蛋白定量,因为跑电泳蛋白浓度过高会很难看,浓度低了看不清楚.