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请教CTAB法提取DNA质量检测问题DNA液测定230nm、260nm及280nm处的光吸收,OD260/OD280比值大于2.0,表明有RNA污染;小于1.8,表明有蛋白质、酚等杂质。OD260/OD230比值大于2.
题目详情
请教CTAB法提取DNA质量检测问题
DNA液测定230nm、260 nm及280 nm处的光吸收,O D 2 6 0/O D 2 8 0 比值大于2 .0 ,表明有R N A 污染;小于1 .8 ,表明有蛋白质、酚等杂质。O D 2 6 0/O D 2 3 0比值大于2.0表明无小分子和盐类杂质干扰。DNA样品在琼脂糖凝胶电泳只能检测DNA是否断裂成小片段和样品是否混有RNA杂质。对吗?
O D 2 6 0/O D 2 8 0和琼脂糖凝胶电泳都能检测样品是否混有RNA,为什么大家都用电泳法,哪种方法灵敏度高?
DNA液测定230nm、260 nm及280 nm处的光吸收,O D 2 6 0/O D 2 8 0 比值大于2 .0 ,表明有R N A 污染;小于1 .8 ,表明有蛋白质、酚等杂质。O D 2 6 0/O D 2 3 0比值大于2.0表明无小分子和盐类杂质干扰。DNA样品在琼脂糖凝胶电泳只能检测DNA是否断裂成小片段和样品是否混有RNA杂质。对吗?
O D 2 6 0/O D 2 8 0和琼脂糖凝胶电泳都能检测样品是否混有RNA,为什么大家都用电泳法,哪种方法灵敏度高?
▼优质解答
答案和解析
RNA的OD260/OD280大于2.0
DNA是1.9左右
有蛋白质的话比值下降,小于1.8就认为有较多的蛋白了。
但是这实际并不是定量的关系,比值受试剂、样品的影响,特别是样品中如果蛋白质对这个波段有吸收峰(实际上经常有)或者有较多的游离碱基,误差就一塌糊涂了。所以这个方法和电泳一样只能作为定性处理。说白了只能判断比值高的就是核酸多,比值低的就是蛋白多,RNA多不多参考一下是否大于2.0。所以个人经验认为DNA粗提物去测吸光度是杀鸡用牛刀,外加不靠谱。
至于电泳,只能检测DNA的情况,RNA因为很难和EB结合,所以无法显示。也就是无法判断RNA的含量。DNA含量也是根据上样量和条带亮度根据经验来判断。
用什么方法要看有什么要求,在满足要求的前提下什么方法简单方便用什么方法。不是说什么方法精确就用什么方法。比如你不过是跑个PCR,何必去检测RNA浓度呢?跑个电泳不就行了么,也省的你洗比色皿。电泳的时候还能上网灌灌水,何乐而不为。要是我,我连RNase都懒得加,对PCR又多大影响,浪费这个钱做什么呢。
如果你的样品需要非常纯净,那就需要去测OD,而且是应该先进行纯化后再去测OD,样品比较纯净的时候吸光度法才比较靠谱,说白了就是检验一下纯化是否成功。
DNA是1.9左右
有蛋白质的话比值下降,小于1.8就认为有较多的蛋白了。
但是这实际并不是定量的关系,比值受试剂、样品的影响,特别是样品中如果蛋白质对这个波段有吸收峰(实际上经常有)或者有较多的游离碱基,误差就一塌糊涂了。所以这个方法和电泳一样只能作为定性处理。说白了只能判断比值高的就是核酸多,比值低的就是蛋白多,RNA多不多参考一下是否大于2.0。所以个人经验认为DNA粗提物去测吸光度是杀鸡用牛刀,外加不靠谱。
至于电泳,只能检测DNA的情况,RNA因为很难和EB结合,所以无法显示。也就是无法判断RNA的含量。DNA含量也是根据上样量和条带亮度根据经验来判断。
用什么方法要看有什么要求,在满足要求的前提下什么方法简单方便用什么方法。不是说什么方法精确就用什么方法。比如你不过是跑个PCR,何必去检测RNA浓度呢?跑个电泳不就行了么,也省的你洗比色皿。电泳的时候还能上网灌灌水,何乐而不为。要是我,我连RNase都懒得加,对PCR又多大影响,浪费这个钱做什么呢。
如果你的样品需要非常纯净,那就需要去测OD,而且是应该先进行纯化后再去测OD,样品比较纯净的时候吸光度法才比较靠谱,说白了就是检验一下纯化是否成功。
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