黄曲霉毒素B1（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变．某些微生物能合成AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性．如

Question

黄曲霉毒素B₁（AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变．某些微生物能合成AFB1解毒酶．将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性．如图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图：

请回答：
（1）基因工程操作的关键步骤是___，运载工具（体）有___，___，___类型；
（2）将目的基因导入酵母细胞，最常用的化学方法是___；
（3）酵母细胞导入AFB1解毒酶基因后，采用___技术，检测到AFB1解毒酶基因存在酵母细胞内．实验发现酵母菌中没有检测到合成的AFB1解毒酶，分析原因可能是___．检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶．应采用___方法．
（4）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的___．

Answer 1

（1）基因工程操作的关键步骤是基因表达载体；基因工程的运载工具（体）有质粒，动植物病毒，λ噬菌体的衍生物．
（2）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法．
（3）检测目的基因是否导入受体细胞后，常用DNA分子杂交技术；实验发现酵母菌中没有检测到合成的AFB1解毒酶，其原因可能是该基因未转录．检测目的基因是否表达，应该采用抗原-抗体杂交方法．
（4）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建      质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒
（2）感受态转化法
（3）DNA分子杂交      该基因未转录      抗原-抗体杂交
（3）脱氧核苷酸序列