抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值．昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～6℃，鱼的热滞值为0.7～1.

Question

抗冻蛋白是一类抑制冰晶生长的蛋白质，能降低水溶液的冰点，从而导致水溶液的熔点和冰点出现差值，这个温度差称为热滞值．昆虫抗冻蛋白的热滞值最高，为3～6℃，鱼的热滞值为0.7～1.5℃，因此，昆虫抗冻蛋白在实际应用上具有更大的潜力．为了扩展一些植物的生存范围，科学家利用昆虫抗冻蛋白（AFPS）的异源表达，现已成功地提高了烟草的抗冻能力．请分析回答相关问题：
（1）基因工程的核心步骤是___，这一过程需要的酶是___．将AFPS基因导人烟草细胞中，常用___法，这是因为烟草属于___ （单/双）子叶植物，当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的___，此操作过程中使用的运载体是___．
（2）若检测AFPS基因是否整合到烟草的染色体上，一般采用___技术，若检测是否产生抗冻蛋白，一般采用___方法检测杂交带；还可以从___水平进行抗冻鉴定．

Answer 1

（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．构建基因表达载体时，需先采用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．农杆菌是一种在土壤中生活的微生...