求助：实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发，怎么解决？用的是ABI7500我做实时荧光定量PCR，有两个问题要解决：1.PCR之后发现反应体系减少了，可能是因为蒸发了，但是我在PCR之前使劲盖

Question

求助：实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发，怎么解决？用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR，有两个问题要解决： 1.PCR之后发现反应体系减少了，可能是因为蒸发了，但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了，为什么还会减少。 2.PCR反应体系有气泡，对PCR的结果影响大吗 ？

Answer 1

你盖紧了盖子不等于就盖紧了PCR管。可能你用的是国产的PCR管吧。通常国产的质量稍差，本身就是密封不严的。也就是说PCR管口不够严密，盖上PCR管子的盖，也不能完全密封。这样即使你怎么使劲盖，也没有用。要解决蒸发的问题，有两个办法，一个是用进口管，可以有效的减少蒸发，但如果你体系做得太小，比如5微升，那么蒸发可能还是比较明显。另一个办法就是还用你原来的PCR管子，但是把体系加大！比如你原来做15微升，现在改到做30微升，保证即使蒸发了也能够你用！ PCR反应有气泡很可能是因为你把PCR管放入PCR仪之前没有离心！通常我们会瞬离一下，把气泡离掉！PCR反应是不可能产生气泡的，因为只是简单的加热，降温的变化，没有达到沸腾。如果有气泡的话得看你的体系有多大，如果太小，是会有影响的。另外你可以在设置PCR程序是稍微把体系设置大一点，比如你做30微升体系，你就设置成40微升。 希望我的回答能令你满意。