研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索．下图是对标记基因（绿色荧光蛋白基因，用GFP表示）和N基因的酶切过程

Question

研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索．下图是对标记基因（绿色荧光蛋白基因，用GFP表示）  和N基因的酶切过程．请据图分析回答下列问题：

（1）切割基因时选用不同限制酶的目的是___．切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP-N融合基因（以下称融合基因），该融合基因的上游基因为___．
（2）若用质粒做运载体，需用图中的___酶切割质粒．在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为___．
（3）将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为___．用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有___现象的ES细胞转染了融合基因．
（4）ES细胞在功能上具有___，当培养在___上时，细胞只分裂不分化．将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行___，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗．

Answer 1

（1）切割基因时选用不同限制酶，形成的黏性末端不同，这样可以防止基因自身环化和不正确的连接．切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP-N融合基因（以下称融合基因），由于GFP基因切割是左端，而N基因切割是右端，因此该融合基因的上游基因为N基因．
（2）由于融合基因的两端限制酶切割位点分别为KanⅠ、XbaⅠ，因此若用质粒做运载体，需用这两种酶切割质粒．在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为启动子和终止子．
（3）融合基因的化学本质为DNA，DNA属于大分子，因此进入细胞的方式为胞吞．用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有绿色荧光现象的ES细胞转染了融合基因．
（4）ES细胞在功能上具有发育的全能性，当培养在饲养层细胞上时，细胞只分裂不分化．将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行分裂、分化，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗．
故答案为：
（1）防止基因自身环化和不正确的连接        N基因
（2）KanⅠ、XbaⅠ启动子和终止子
（3）胞吞       绿色荧光
（4）发育的全能性       饲养层细胞      分裂、分化