荧光定量PCR对肠道乳酸杆菌的定量问题我现在做的是绝对荧光定量PCR法定量肉鸡肠道中乳酸杆菌的数量,用的是SYBRGreenI染料法,引物是针对细菌16srDNA设计的.现在遇到的问题是标准曲线的建立,

题目详情

荧光定量PCR对肠道乳酸杆菌的定量问题
我现在做的是绝对荧光定量PCR法定量肉鸡肠道中乳酸杆菌的数量,用的是SYBRGreenI染料法,引物是针对细菌16s rDNA设计的.现在遇到的问题是标准曲线的建立,我查过文献发现关于标准曲线的建立可用重组质粒去构建,也可以直接将标准菌株的基因组提取后经过稀释而形成标准品.如果用重组质粒去构建,会出现的问题是16s rDNA在细菌基因组中并非单拷贝,这就意味着用重组质粒去构建标准曲线无法直接定量细菌的个数.因而我想选择用基因组去构建,可是关于基因组构建方法也有几个问题：1同一菌属,不同菌株间16s rDNA的拷贝数差异有多大.2基因组中16s rDNA的拷贝数是否受细菌的传代或环境的影响.我查过文献,其中没有关于这些问题的解释.在此跪谢各位老师了啊!

▼优质解答

答案和解析

我个人理解是重组质粒应该是将16s rDNA的序列重组到某质粒上,然后根据质粒的量来计算质粒的拷贝数作为标准品,这种标准品有些是有商业化的,并不是你所谓的在基因组中是否是单拷贝,我们实验室的标准品都是这么来的,没有用细菌的基因组DNA做过标准品.

看了荧光定量PCR对肠道乳酸杆菌...的网友还看了以下：

小麦中,光颖和毛颖是一对相对性状,小麦中,光颖和毛颖是一对相对性状（显性基因用P表示）,抗锈病和不抗　2020-03-31 …

在圆的周长公式C=2πR中.常量与变量分别是().(A)2是常量，C、π、R是变量(B)2兀是常量　2020-04-12 …

增减函数问题奇偶函数问题y=f(x)的定义域是R,对任意AB属于R都有f(A+B)=f(A)+f( 　2020-06-06 …

M、R都是生活中常见的金属单质,其中R是用量最多的金属.甲、乙是化合物,其中甲是黑色晶体,可由R在　2020-06-06 …

和广义坐标有关系的问题在广义坐标表示的矢径r=(q1,q2,q3,……,t)中,广义坐标和时间有没　2020-06-14 …

小麦的毛颖和光颖是一对相对性状（显、隐性分别由P、p基因控制），抗锈和感锈是另一对相对性状（显、隐　2020-06-24 …

线性方程组Ax=b,有唯一解的充要条件是R（A）=R(A,b)=n,现在R（A）=n,则b怎样才能　2020-07-13 …

已知函数f（x）在R上是单调函数，且满足对任意x∈R，都有f[f（x）-3x]=4，则f（4）的值　2020-07-17 …

弧长计算公式里为什么要除180在半径是R的圆中,因为360°的圆心角所对的弧长就等于圆周长C＝2π 　2020-07-26 …

函数f（x）的定义域为R,并满足以下条件：①对任意x∈R,有f（x）>0②对任意xy∈R,有f（x 　2020-08-01 …