荧光定量PCR对肠道乳酸杆菌的定量问题我现在做的是绝对荧光定量PCR法定量肉鸡肠道中乳酸杆菌的数量,用的是SYBRGreenI染料法,引物是针对细菌16srDNA设计的.现在遇到的问题是标准曲线的建立,

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荧光定量PCR对肠道乳酸杆菌的定量问题
我现在做的是绝对荧光定量PCR法定量肉鸡肠道中乳酸杆菌的数量,用的是SYBRGreenI染料法,引物是针对细菌16s rDNA设计的.现在遇到的问题是标准曲线的建立,我查过文献发现关于标准曲线的建立可用重组质粒去构建,也可以直接将标准菌株的基因组提取后经过稀释而形成标准品.如果用重组质粒去构建,会出现的问题是16s rDNA在细菌基因组中并非单拷贝,这就意味着用重组质粒去构建标准曲线无法直接定量细菌的个数.因而我想选择用基因组去构建,可是关于基因组构建方法也有几个问题：1同一菌属,不同菌株间16s rDNA的拷贝数差异有多大.2基因组中16s rDNA的拷贝数是否受细菌的传代或环境的影响.我查过文献,其中没有关于这些问题的解释.在此跪谢各位老师了啊!

▼优质解答

答案和解析

我个人理解是重组质粒应该是将16s rDNA的序列重组到某质粒上,然后根据质粒的量来计算质粒的拷贝数作为标准品,这种标准品有些是有商业化的,并不是你所谓的在基因组中是否是单拷贝,我们实验室的标准品都是这么来的,没有用细菌的基因组DNA做过标准品.

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