下图四种质粒含有El和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因．将两端用El切开的Tcr基因与用E1切开的质粒（X-1）混合连接，连接后获得的质粒类型不

Question

下图四种质粒含有E_l和E₂两种限制酶的识别，Ap^r表示抗青霉素的抗性基因，Tc^r表示抗四环素的抗性基因．将两端用El切开的Tc^r基因与用E₁切开的质粒（X-1）混合连接，连接后获得的质粒类型不可能是（　　）

A．
X-1
B．
X-2
C．
X-3
D．
X-4

Answer 1

A、用E₁切开的质粒和Ap^r基因的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可以恢复为（X-1），故A正确；
B、将两端用El切开的Tc^r基因与用E₁切开的质粒（X-1）混合连接，由于Tc^r基因和切开的质粒（X-1）两端黏性末端相同，所以可以在DNA连接酶的作用下形成重组质粒（X-2），故B正确；
C、用E₁切开质粒（X-1）后，由于其两端黏性末端相同，所以可以在DNA连接酶的作用下自身环化形成（X-3），故C正确；
D、用E₁酶切开的Tc^r基因，不能插入E₂的酶切位点，故D错误．
故选：D．