实时定量PCR过程中TaqMan探针浓度与模板浓度的关系?TaqMan探针的浓度是不是必须小于模板的浓度?探针未与模板结合之前发荧光吗?

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实时定量PCR过程中Taq Man探针浓度与模板浓度的关系?
Taq Man探针的浓度是不是必须小于模板的浓度?探针未与模板结合之前发荧光吗?

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答案和解析

探针的浓度肯定要比初始加入的DNA模板的浓度高的,而且不是一般的高,而是指数级的,2的几十次方,因为PCR每扩增一次,就要消耗与模板对应浓度的探针,随着扩增的进行模板以指数增长,每个循环需要的探针当然也是指数增长的.对于单独的一此PCR循环来讲,需要的探针量与模板量是1：1的.
探针与模板结合前,探针上的发光基团发出的荧光被探针上的淬灭基团吸收了,所以不发光,与模板结合后,淬灭基团被Taq聚合酶切下来,发光基团发出的荧光就会被仪器检测到了.

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