T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA

Question

T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T ₁ 代）。

环状DNA示意图
A、B、C、D表示能与相应T—DNA链
互补、长度相等的单链DNA片段；
箭头指示DNA合成方向。
（1）为筛选出已转化的个体，需将T ₁ 代播种在含           的培养基上生长，成熟后目交，收获种子（称为T ₂ 代）。
（2）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T ₂ 代播种在含           的培养基上，获得所需个体。 
（3）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与           植株进行杂交，再自交           代后统计性状分离比。
（4）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性           。
（5）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。
其过程是：提取           植株的DNA，用限制酶处理后，再用           将获得的DNA片段连接成环（如下图）。以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取           作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。

Answer 1

（9分）   （1）（一定浓度的）除草剂   （2）（一定浓度的）盐（3）野生型    1   （4）降低（5）突变体  DNA连接酶    B、C（2分）