研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达．抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗

Question

研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达．抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段．

（1）选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中___（填“低表达”或“高表达”）．H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示．制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建___区基因，转入原核细胞表达并提纯．
（2）将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠的脾脏细胞与___细胞进行融合，使用的化学诱导剂是___，细胞融合的原理是___．
（3）将融合细胞在___培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长．将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取有克隆生长的细胞培养液中的___（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用___技术进行抗体阳性检测．经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞．
（4）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过___或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体．
（5）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞．这充分体现了单克隆抗体___的特点．

Answer 1

（1）H蛋白在成年个体的正常组织中低表达，选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，既能抑制癌细胞生长，又对正常组织细胞影响较小．由于H蛋白是一个跨膜蛋白，只要选择胞外区的基因进行构建，转入原核细胞表达并提纯即可获得相应抗原．
（2）取经H蛋白处理的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合，化学诱导剂通常使用PEG，细胞融合的原理是细胞膜的流动性．
（3）融合细胞需要用选择培养基筛选出既能分泌抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞．利用抗原-抗体杂交技术来确定克隆生长的细胞培养孔中的上清液中是否含有相应的抗体．
（4）培养杂交瘤细胞的方法有体外培养和小鼠腹腔内培养．
故答案为：
（1）低表达    胞外
（2）骨髓瘤      PEG（或聚乙二醇）      细胞膜的流动性
（3）选择     上清液      抗原-抗体杂交
（4）体外（培养）
（5）特异性强（或识别抗原部位专一）