33、酶切图谱是描述限制性内切酶的酶切点的位置和距离信息的图谱，通常选取某一特定长度的DNA分子，用多种限制酶单独或联合切割．再通过电泳技术将酶切片段进行分离，计算相对大小

Question

33、酶切图谱是描述限制性内切酶的酶切点的位置和距离信息的图谱，通常选取某一特定长度的DNA分子，用多种限制酶单独或联合切割．再通过电泳技术将酶切片段进行分离，计算相对大小，从而确定每一种限制酶在DNA分子中的切点位置和相对距离．下图表示BamHⅠ、BstⅠ、BglⅡ三种限制酶识别的核苷酸序列和切割位点，表格中数据是用限制酶EcoRV、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度．请回答下列问题：

（1）限制性内切酶BamHⅠ与BstⅠ作用的特点是______，BamHI与BglⅡ作用的特点是______．黏性末端重组的DNA分子______ （能/不能）被BglⅡ识别．
（2）请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboⅠ的切割位点．
（3）DNA连接酶与DNA聚合酶作用的共同点都形成是______键，不同点是______．
（4）在基因工程中，检测受体细胞是否含有目的基因采用的方法是______．

Answer 1

（1）限制酶BamHⅠ与BstⅠ能识别相同的核苷酸序列，而且切点相同；BamHI与BglⅡ识别的核苷酸序列不同，但能产生相同的黏性末端作．黏性末端重组的DNA序列为GGATCT∥CCTAGG，而限制酶BglⅡ的识别序列为AGATCT∥TCTAGA，根据酶的专一性原理可知，重组DNA分子不能被BglⅡ识别．
（2）用限制酶EcoRV单独切割时，只能形成一种长度的DNA片段，说明该质粒上只有一个EcoRV酶切位点；用限制酶MboⅠ单独切割时，能形成两种长度的DNA片段，说明该质粒上有2个MboⅠ酶切位点；用限制酶EcoRV、MboⅠ同时切割时，能形成三种长度的DNA片段，且其中11.5kb的DNA片段被切割成两段，说明该片段上有一个EcoRV酶切位点，因此质粒上EcoRV、MboⅠ的切割位点如图所示：

（3）DNA连接酶与DNA聚合酶作用的共同点都形成是磷酸二酯键，不同点是DNA连接酶连接DNA片段之间的磷酸二酯键，DNA聚合酶连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键．
（4）检测受体细胞是否含有目的基因常用DNA分子杂交技术．
故答案为：
（1）识别相同的核苷酸序列，而且切点相同     识别的核苷酸序列不同，产生相同的黏性末端    不能
（2）

（3）磷酸二酯    DNA连接酶连接DNA片段之间的磷酸二酯键，DNA聚合酶连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键
（4）DNA分子杂交技术