（7分）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接

Question

（7分）重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别PCR，获得有重叠链的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识，分析下列问题。

(1)引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性                。

(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA 的过程中，必须将引物l、2和引物3、4  置于不同反应系统中，这是因为                                                  。

(3)引物l、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生         种双链DNA分子。

(4)在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过        次复制。

(5)若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：           、               、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。

 

Answer 1

（1）越高（2）引物2和引物3存在互补配对片段，置于同一反应系统中它们会发生结合而失去作用（2分）（3）3（4）2（5）目的基因与载体结合  将目的基因导入受体细胞