为了调查某城市自来水的水质情况，某研究小组对自来水水样中的大肠杆菌含量进行了测定，请回答下列问题：（1）检测自来水中大肠杆菌的数量，可选用伊红美蓝培养基，伊红美蓝培养基

Question

为了调查某城市自来水的水质情况，某研究小组对自来水水样中的大肠杆菌含量进行了测定，请回答下列问题：
（1）检测自来水中大肠杆菌的数量，可选用伊红美蓝培养基，伊红美蓝培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还可以提供___等基本营养成分．该研究小组在统计菌落数目时，选取菌落数目未定时的记录作为结果，这样可以防止因___而遗漏菌落的数目．
（2）在接种前，该研究小组随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，结果发现空白对照组的平板上出现了6个菌落，请分析说明可能的原因（写出两点）：①___；②___．若空白平板上无菌落出现，其他三组实验组平板上菌落平均数为33-35个，这些平板需要在37℃温度下，pH调至___的条件下培养1-2d．
（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌目的是___．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是___；划线时落在培养基上共画了5个区域，则需要___次灼烧接种环．
（4）直接给牲口饮用自来水或河水，牲口易出现腹泻．在饮水中加土霉素可预防牲口出现大面积腹泻，但长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这一过程的实质是大肠杆菌种群的___发生了变化．

Answer 1

（1）微生物培养基成分应包括水、无机盐、碳源、氮源等．
（2）为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空白平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成．
（3）接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落．每次划线之前及接种之后都要对接种环进行灭菌，因而划5个区域，则需要6次灼烧接种环．
（4）长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这是人工选择的结果，实质是大肠杆菌种群的抗药性基因频率发生了变化．
故答案为：
（1）氮源和无机盐     培养时间不足
（2）培养基灭菌不合格   倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）   中性或微碱性
（3）杀死上次划线后接种环上残留的菌种将聚集的菌体逐步进行稀释，以获得单个菌落    6
（4）抗药性基因频率