研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题。（1）从肝细胞中分离出

Question

研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题。

（1）从肝细胞中分离出相应的RNA，经________获得内皮抑素基因，再经________进行扩增，以获得更多的目的基因。

（2）扩增的目的基因与pUC18质粒(如图所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了目的基因与目的基因、载体与载体的连接，提高了重组质粒的比例。

（3）大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有________和氨苄青霉素。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成________颜色的菌落，原因是__________________。

（4）从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37 ℃培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72 h后在显微镜下观察细胞存活情况并统计(或记录)活的内皮细胞数目，实验结果如下表所示。

粗提表达产物浓度/(μg·mL－1)	0	2	4	6	8	10
活的内皮细胞数目(×102)	12	6	2	1	0.5	0.5

实验结果说明_____________________________________________________

_____________________________________________________________。

 

Answer 1

(1)反转录(或逆转录)　 (聚合酶链式反应)(2)反向(任意)(3)IPTG、X－gal  　白　重组质粒的LacZ基因中插入了目的基因，使LacZ基因不能表达出β－半乳糖苷酶(4)