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PCR技术中不是必须要在引物后面形成DNA链么?那不是越来越短么?怎么生成大量DNA链的呢?
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PCR技术中不是必须要在引物后面形成DNA链么?那不是越来越短么?怎么生成大量DNA链的呢?
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答案和解析
PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物.设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准）,5′端引物与位于待扩增片段5′端上游的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补.
DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的.DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA）,因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的.而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成.两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物.
PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸；而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了.
DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的.DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA）,因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的.而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成.两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物.
PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸；而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了.
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