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梯度PCR疑惑请各位帮帮忙我做梯度升温PCR,从55度到62读的升温,两引物的Tm值相差2度,算的平均值为62度,跑胶后,都跑有目的条带.55度条带最亮,其它亮度较淡且差不多.之后我用55度的退火温度,用
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梯度PCR疑惑请各位帮帮忙
我做梯度升温PCR,从55度到62读的升温,两引物的Tm值相差2度,算的平均值为62度,跑胶后,都跑有目的条带.55度条带最亮,其它亮度较淡且差不多.之后我用55度的退火温度,用第一次的PCR产物做模板进行PCR,跑胶什么都没有,这是怎么回事啊?难道产物降解了?（第一次产物我存于4度.可是再做第一次产物的跑胶还是有条带啊）或是其它原因?）
我做梯度升温PCR,从55度到62读的升温,两引物的Tm值相差2度,算的平均值为62度,跑胶后,都跑有目的条带.55度条带最亮,其它亮度较淡且差不多.之后我用55度的退火温度,用第一次的PCR产物做模板进行PCR,跑胶什么都没有,这是怎么回事啊?难道产物降解了?（第一次产物我存于4度.可是再做第一次产物的跑胶还是有条带啊）或是其它原因?）
▼优质解答
答案和解析
博凌科为-为你我觉得一种可能是模板量过多,如果55度条带最亮的话你可以把它稀释10-50倍做模板.再就是产物降解,这方面也很有可能,我以前也遇到过相同问题,最后还是换了模板成功的.还有建议你下次批的时候做55和62两个梯度,这样比较保险
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