如何理解样品制备过程中蛋白质分离,提取和纯化?蛋白质样品的制备有哪些过程?各个过程的意义是什么?1.为什么蛋白质能进行电泳？2.蛋白质电泳由一向电泳发展为双向电泳，应用了蛋白质

Question

如何理解样品制备过程中蛋白质分离,提取和纯化?
蛋白质样品的制备有哪些过程?各个过程的意义是什么?
1.为什么蛋白质能进行电泳？
2.蛋白质电泳由一向电泳发展为双向电泳，应用了蛋白质的那些特性？
3.常规聚丙烯凝胶电泳的基本原理？SDS的作用是什么？

Answer 1

蛋白质样品的制备主要包括分离和纯化两大步骤.前者是从生物体中提取出蛋白质,后者是提纯某一种目标蛋白.
1 蛋白质带有电荷,是两性分子,因此能够在电场中运动,因此能够电泳.
2 双向电泳中的第一向（等电聚焦）利用了蛋白质在不同pH值下带有不同的电荷,从而可以在等电聚焦中停止在蛋白分子不带电的pH值带上.而第二项(SDS-PAGE)则是利用不同大小的蛋白质在PAGE胶中泳动速率不同,即通过蛋白质分子量大小来区分.
3 聚丙烯凝胶电泳的基本原理是蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中,可因为自身大小缘故在凝胶的孔洞中运动,越大的蛋白受到的阻力越大,因此泳动越慢,从而分离蛋白.SDS的作用是变性蛋白,并中和电性,使得蛋白质的泳动速率只决定于其分子量大小.