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T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来.用的是 ClaⅠ ,EcoR Ⅰ 两种酶 体系20酶切 3小时 过夜 都试过了 期待解决
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T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来.
用的是 ClaⅠ ,EcoR Ⅰ 两种酶 体系20
酶切 3小时 过夜 都试过了
期待解决
用的是 ClaⅠ ,EcoR Ⅰ 两种酶 体系20
酶切 3小时 过夜 都试过了
期待解决
▼优质解答
答案和解析
解决办法：1、cla1是一个比较不常见的酶,可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样,试着分别酶切,就是先切cla1,然后纯化后切ECOR1；或者查找哪个酶的酶切效率高些,那个后切；2、3个小时可能太短了,我一般都是5个小时,或者过夜；3、可能是你菌挑错了,或污染了,重新调菌或者把原来构建成功的质粒进行转化,再酶切.
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