马术比赛被称为贵族运动．英国纯血马是世界顶級马术比赛的常用马种，其数量少，生育力低．可利用图1和图2含有目的基因的外源DNA，结合其他现代生物技术，有效提高优质马的生育效率

Question

马术比赛被称为贵族运动．英国纯血马是世界顶級马术比赛的常用马种，其数量少，生育力低．可利用图1和图2含有目的基因的外源DNA，结合其他现代生物技术，有效提高优质马的生育效率和品质．请回答下列问题：

（1）若将图l中质粒和图2中含目的外源DNA通过限制酶处理后，进行拼接形成重组质粒，那么最好应选用限制酶___．对符合设计要求的重组质粒用SmaI、EcoR I和HindⅢ三种酶，同时进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，则可得___种DNA片段．若仅选用EcoR I处理后，形成重组质粒．经检测，部分含有重组质粒的受体细胞中目的基因不能正确表达，最可能的原因是___•
（2）为了提高优良雌性个体的繁殖潜能，用___激素处理适齡纯血母马，使其一次性排出比自然情况下多几倍到几十倍的卵子．体外受精前要对精子进行一定的处理，使其___，为取得同卵双胎或多貽，可以在胚貽发育的___期用机械方法进行胚胎分割．
（3）随着动物克隆技术的发展，人们可以将纯血马的细胞核移入其他马的___细胞中，将其激活并发育成胚胎，植入代孕母马体内，为保证胚胎移植的成功，胚胎的供体和受体应保持___．

Answer 1

（1）图2中含有目的基因的外源DNA分子不能用SmaⅠ切割，因为用该酶切割后将导致目的基因被破坏，同时也不能用EcoRⅠ一种酶来切割，因为切割之后形成的片段易发生自身环化现象；图1中质粒也不能SmaⅠ切割，因为用该酶切割会破坏抗生素抗性基因（标记基因）；同时也不能用SnaBⅠ和BamHⅠ切割，因为这两种酶的酶切位点没有同时出现在质粒和含有目的基因的外源DNA分子中．因此，最好应选用限制酶EcoRⅠ和HindⅢ同时切割．用EcoRⅠ和HindⅢ两种酶切割后经重组形成的符合要求的重组质粒上含有2个SmaⅠ、1个EcoRⅠ、1个HindⅢ识别位点，经SmaⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ三种酶同时进行酶切，该环状DNA分子将被切割成4种DNA片段．若用EcoRⅠ处理，因为同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接，故导致部分含有重组质粒的受体细胞中目的基因不能正确表达．
（2）给良种母畜注射促性腺激素可促使其超数排卵．体外受精前要对精子进行获能处理；一般选取形态正常、发育良好的桑椹胚或囊胚进行胚胎分割．
（3）核移植时将纯血马的细胞核移入其他马的去核卵母细胞中，将其激活并发育成胚胎，植入代孕母马体内；胚胎移植时，为保证胚胎移植的成功，胚胎的供体和受体应保持相同的生理环境．
故答案为：
（1）EcoR I和HindⅢ4     同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因与质粒反向连接
（2）促性腺    获能     桑椹胚或囊胚
（3）去核卵母    相同的生理环境