为了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA，科研人员比较了A方法（通过CTAB裂解细胞，并与蛋白质形成复合物）、B方法（通过SDS裂解细胞释放核DNA，使蛋白质变性）、C方法（通过高盐沉淀蛋

Question

为了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA，科研人员比较了A方法（通过CTAB裂解细胞，并与蛋白质形成复合物）、B方法（通过SDS裂解细胞释放核DNA，使蛋白质变性）、C方法（通过高盐沉淀蛋白质）从嫩叶、块根中提取总DNA的效果，主要实验步骤和相关检测结果如下，其中氯仿-异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-异戊醇，蛋白质等溶于氯仿-异戊醇．分析回答：
①将液氮冷冻的组织研磨成粉末
↓
②分别用A、B、C三种不同方法处理
↓
③DNA粗提液在65℃水浴保温60min，搅拌均匀
↓
④加氯仿-异戊醇，离心取？，加冷酒精，收集沉淀
↓
⑤加入RNA酶，37℃水浴保温20min，重复步骤④
↓
⑥将沉淀室温干燥后，溶于超纯水中，-20℃保存备用
结果检测

组织	方法	组别	OD260/OD230	OD260/OD280	得率/μg•mg-1
嫩叶	A方法	A1	1.970	1.821	0.105
	B方法	B1	1.973	1.719	0.096
	C方法	Cl	1.647	1.568	0.082
块根	A方法	A2	1.888	1.888	0.029
	B方法	B2	1.811	1.682	0.030
	C方法	C2	1.376	1.320	0.020

注：①纯净的DNA样品OD₂₆₀/OD₂₃₀值约为2.0，过低表明小分子物质残留较多；②纯净的DNA样品OD₂₆₀/OD₂₈₀值约为1.8，若比值大于1.8表示存在RNA残留，若小于1.8表示存在蛋白质残留．③得率是指每毫克组织所提取的DNA量．
（1）步骤③将DNA粗提液在65℃水浴保温60min的目的是___．步骤④“？”表示___．
步骤⑤中加RNA酶的作用是___．
（2）影响DNA纯度的物质主要有___．提取的DNA中RNA残留较多的方法是___．为材料提取DNA的得率较高，原因是___．
（3）电泳可以直观对比DNA的完整性，分子大小不同的DNA在凝胶上迁移速率不同，从而产生不同的条带．如图是上述实验中提取到的总DNA 凝胶电泳结果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物．实验结果显示A、B方法提取的总DNA电泳结果只有一条带，而C方法有明显的“拖尾”现象．

①只出现一条带的原因是___．
②出现“拖尾”现象的原因是___．

Answer 1

（1）步骤③将DNA粗提液在65℃水浴保温60min的目的是使蛋白质变性．由于“氯仿-异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-异戊醇”，因此步骤④“？”表示上清液．RNA酶的作用是水解RNA，去除RNA杂质．
（2）影响DNA纯度的物质主要有蛋白质、RNA、小分子物质．根据题干信息“OD₂₆₀/OD₂₈₀比值大于1.8表示存在RNA残留”可知，提取的DNA中RNA残留较多的方法是A方法．细胞分裂过程中会进行DNA的复制，因此用细胞分裂旺盛的材料提取DNA的得率较高．
（3）①只出现一条带的原因是甜菜细胞基因组DNA分子都比较大，不容易分离．
②出现“拖尾”现象的原因是DNA发生断裂或降解，形成许多大小不等的DNA片段．
故答案为：
（1）使蛋白质变性  上清液    水解RNA，去除RNA杂质
（2）蛋白质、RNA、小分子物质        A方法      细胞分裂旺盛
（3）①甜菜细胞基因组DNA分子都比较大，不容易分离
②DNA发生断裂或降解，形成许多大小不等的DNA片段