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请教关于构建cdna文库载体的问题 我需要能将导入的基因表达为蛋白的表达载体不知道p-bulescript XR可以不可以 它能表达外源基因吗 如果不可以 有莫有有经验的可以推荐个建库用表达载体呢?
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请教关于构建cdna文库载体的问题 我需要能将导入的基因表达为蛋白的表达载体
不知道p-bulescript XR可以不可以 它能表达外源基因吗 如果不可以 有莫有有经验的可以推荐个建库用表达载体呢?请求专业人士,非常感激啦,要是有人有吴乃虎的联系方式也可以告知,谢谢
不知道p-bulescript XR可以不可以 它能表达外源基因吗 如果不可以 有莫有有经验的可以推荐个建库用表达载体呢?请求专业人士,非常感激啦,要是有人有吴乃虎的联系方式也可以告知,谢谢
▼优质解答
答案和解析
建库的话随便找个T载体就可以了,只要方便测序就好,至于要实现原核表达的话我个人建议您还是在完成测序后将表达框分离（PCR也好、酶切也好）,连接到原核表达载体,我个人推荐使用IPTG诱导、含有组氨酸标签的表达载体,这样也方便后期的纯化工作等.
当然如果想直接在普通的大肠杆菌中表达也是可以的,比如前一段时间我搞土壤DNA文库时就是直接将文库在含有筛选剂的极限培养基上筛,获得的克隆直接测序,得到了一个基因,当然其表达框前面不远处就是一个35BP的原核启动子,之后就将这个启动子加上个AGGAGG以及GFP基因的上游18bp序列做引物（上游刚好59bp再多一个都不是1.2元每个碱基了）,下游直接是GFP下游引物验证了一下功能.肯定能用的.你也可以试着这样原核表达.不过很冒风险.
当然如果想直接在普通的大肠杆菌中表达也是可以的,比如前一段时间我搞土壤DNA文库时就是直接将文库在含有筛选剂的极限培养基上筛,获得的克隆直接测序,得到了一个基因,当然其表达框前面不远处就是一个35BP的原核启动子,之后就将这个启动子加上个AGGAGG以及GFP基因的上游18bp序列做引物（上游刚好59bp再多一个都不是1.2元每个碱基了）,下游直接是GFP下游引物验证了一下功能.肯定能用的.你也可以试着这样原核表达.不过很冒风险.
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