再问：做基因克隆为什么要提dna我做苯丙氨酸解氨酶基因的克隆,老师怎么让我提DNA,提RNA不就可以了么,提出RNA,设计引物,然后RT- PCR,得到第一条cDNA链,然后扩增,得到cDNA,接着导入质粒,转化菌株

Question

再问：做基因克隆为什么要提dna
我做苯丙氨酸解氨酶基因的克隆,老师怎么让我提DNA,提RNA不就可以了么,提出RNA,设计引物,然后RT- PCR,得到第一条cDNA链,然后扩增,得到cDNA,接着导入质粒,转化菌株培养,最后的克隆的目的基因,这样不就行了吗

Answer 1

费了很大劲,理了一下头绪. 看你克隆的目的,如果仅仅是为了克隆基因的话, 直接提DNA是最简单的办法,也是最不费功夫的办法, 比如要做不同物种间苯丙氨酸解氨酶基因的比较, 你就可以用直接提DNA的办法, 因为所有的信息都包含在DNA上,包括剪切的位置, 物种间的差异等等. 如果是为了表达这种蛋白的话比如说苯丙氨酸解氨酶, 就需要做你说的以上的工作了,因为RNA转录的时候, 要切除内含子和拼接,最终形成可以编码蛋白的mRNA, mRNA提取出来后,合成cDNA,后面构建cDNA文库. 按照你的做法, 你最后克隆出来的cDNA跟你的目的基因是有差异的, 我查了下文献,这种酶一般在植物体内表达, 做的比较多的工作是克隆完进行序列比对,进化树的研究, 而不是对酶本身进行表达,所以我想你老师的做法是可行的.