研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA，导入果蝇早期胚胎细胞，“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B，得到镶嵌体果蝇（即复眼中部分小眼呈红色，部分小眼呈白色），如下表．

Question

研究者根据果蝇X染色体上红眼基因B设计出sgRNA，导入果蝇早期胚胎细胞，“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B，得到镶嵌体果蝇（即复眼中部分小眼呈红色，部分小眼呈白色），如下表．

sgRNA 浓度（ng/mL）	不注射	0	125	250	500	1000
胚胎存活率（%）	16	11	8	6	7	3
镶嵌体果蝇比例（%）	0	0	10	17	50	86

（1）从实验结果分析，sgRNA的导入___了果蝇胚胎的存活率，若要从相同数量的早期胚胎中获得数量最多的镶嵌体果蝇，应选用的sgRNA浓度为___ng/mL．
（2）如图所示，敲除基因时，sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对，细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切，引起红眼基因B发生碱基对___，导致基因突变．该过程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于___酶的作用，敲除后需要___酶对DNA上的切口进行修复．

（3）若研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成，应将镶嵌体雄果蝇与表现型为___的果蝇进行杂交，预期杂交后代的表现型是___．
（4）这种定点敲除基因的方法为艾滋病的治疗提供了一个思路．HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞，研究者可以根据___的核苷酸序列设计sgRNA，导人骨髓___细胞中，有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞．

Answer 1

（1）根据实验表格数据结果分析，sgRNA的导入降低了果蝇胚胎的存活率．表格中只有sgRNA浓度为500和1000的两组中镶嵌体果蝇比例，而500浓度的一组胚胎成活率高，因此若要从相同数量的早期胚胎中获得数量最多的镶嵌体果蝇，应选用的sgRNA浓度为500ng/mL．
（2）分析敲除过程图示可知，敲除基因时，sgRNA与红眼基因B的部分序列互补配对，细胞内的Cas9酶在配对区域定点剪切，引起红眼基因B发生碱基对缺失，导致基因突变．该过程中，sgRNA和Cas9酶共同剪切DNA的作用类似于限制（或“限制性核酸内切”）酶的作用，敲除后需要DNA连接酶对DNA上的切口进行修复．
（3）题干中提出，“敲除”部分胚胎细胞中的红眼基因B，得到镶嵌体果蝇（即复眼中部分小眼呈红色，部分小眼呈白色），因此研究者要通过测交实验验证镶嵌体雄果蝇的基因组成，应将镶嵌体雄果蝇与表现型为白眼雌性的果蝇进行杂交，预期杂交后代的表现型是红眼雌性、白眼雌性、白眼雄性．
（4）HIV通过识别膜蛋白C侵入宿主细胞，研究者可以根据膜蛋白C基因的核苷酸序列设计sgRNA，导人骨髓造血干（或“淋巴干”）细胞中，有效阻止HIV侵染新分化生成的T淋巴细胞．
故答案为：
（1）降低    500
（2）缺失    限制（或“限制性核酸内切”）    DNA连接
（3）白眼雌性    红眼雌性、白眼雌性、白眼雄性
（4）膜蛋白C基因    造血干（或“淋巴干”）