为了研究如何提高油菜种子的含油量，研究者将转运肽基因与酶D基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜．请据图回答：（1）研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利

Question

为了研究如何提高油菜种子的含油量，研究者将转运肽基因与酶D基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜．请据图回答：

（1）研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利用___的原理，使相应基因呈指数增加．此技术中最重要的酶是___．三种限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切点如图所示，则用___和___酶处理两个基因后，可得到两基因相连的融合基因．
（2）将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的___中构建基因表达载体，说明此结构的两端有___和___酶的切割序列．然后把重组质粒导入农杆菌中，为了获得含融合基因的单菌落，应进行的操作是___，然后再利用液体培养基将该单菌落振荡培养，可以得到用于转化的侵染液．
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是___，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，依据___的原理，可将其培育成转基因油菜植株．
（4）用___法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

Answer 1

（1）PCR技术利用的原理是DNA双链复制，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．此技术中最重要的酶是耐高温的DNA聚合酶．用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，可以得到A、D端相连的融合基因．（2）将上述融合基因...