SDS-PAGE蛋白质电泳问题刚开始跑,在浓缩胶就不在一条线上,有的已经移动一小节了有的还没开始动,但是跑着跑着大约到分离胶时就又到一条线了上了,不知道怎么回事.电泳时感觉加的样有散的

Question

SDS-PAGE蛋白质电泳问题
刚开始跑,在浓缩胶就不在一条线上,有的已经移动一小节了有的还没开始动,但是跑着跑着大约到分离胶时就又到一条线了上了,不知道怎么回事.电泳时感觉加的样有散的趋势,上样20ul,跑着跑着就连成一条线了,对结果有影响没?原因?电泳时条带歪了在最下面总是乱七八糟的,染色后偏下的地方总是一块不规则紫色的,不是带状.灌胶时胶漏了,对电泳结果有影响没,是不是得重配?分离胶或者浓缩胶配好后使用什么方法使其混匀,用玻璃棒搅拌还是振荡器镇或其他方法以上是我电泳以来的所有问题,感谢所有回答人员.

Answer 1

1,浓缩胶的要求就是将所有蛋白在浓缩胶和分离胶梯度的时候将所有蛋白压缩成一条线,保证他们在同一起跑线上.如果蛋白样品是不同时间的同一种,可能就是浓缩胶没摇匀.
至于加样散,原因就可能是胶质不均了.对于结果应该影响不大.电泳时条带歪了,说明分离胶不匀,最前面的溴酚蓝如果不在一条线上,就是这个问题,对于最终结果有影响,建议重做.当然,在灌注浓缩胶前,你可能使用30%酒精封闭过,酒精除不干净,或者滤纸吸干酒精碰触了胶面,都会有影响,前者会让蛋白传样,导致所有蛋白散了,后者会导致下面电泳条带歪了.
染色后偏下方有紫色,我不清楚,只能认为是杂质……,灌胶漏了无所谓,只要凝固后分离胶能占全版的一半,就能用,兑电泳结果没影响.胶配好后混匀不难,手摇即可.
初学western可以去丁香园看看视频,顺便学下blot,对于以后试验进行会有所帮助.
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