(10分)阅读下列材料,完成问题:用冰冷的稀三氯醋酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆,以除去酸溶性小分子物质;再用有机溶剂,如乙醇、乙醚等抽提,去掉脂溶性的磷
(10分)阅读下列材料,完成问题:
用冰冷的稀三氯醋酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆,以除去酸溶性小分子物质;再用有机溶剂,如乙醇、乙醚等抽提,去掉脂溶性的磷脂等物质。最后用浓盐溶液(10%氯化钠溶液)和?0.5 mol·L -1 高氯酸(70 ℃)分别提取DNA和RNA,再进行定性鉴定。
由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应,经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比,因此可用定糖法来定性定量测定核酸。
测定核酸的常用方法是苔黑酚(即3,5二羟甲苯)法(Orcinol反应)。
当含有核糖的RNA与浓盐酸及3,5二羟甲苯在沸水中加热10~20分钟后,有绿色物质产生。
测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热10分钟后,产生蓝色。
(1)用菜花作实验材料提取DNA和RNA,补充实验步骤:
①取菜花的花冠20 g,剪碎后置于研钵中,加入20 mL 95%乙醇和400 mg海砂,研磨成匀浆。然后用布氏漏斗抽滤,弃去滤液。
②_______________________________________,抽滤,弃去滤液。
③再向滤渣中加入20 mL丙酮,搅拌5分钟后抽干(用力挤压滤渣,尽量除去丙酮)。
④在冰盐浴中,将滤渣悬浮在预冷的20 mL 5%高氯酸溶液中。搅拌抽滤,弃去滤液。
⑤将滤渣悬浮于20 mL 95%乙醇中,抽滤,弃去滤液。
⑥向滤渣中加入20 mL丙酮,搅拌5分钟。抽滤至干,用力挤压滤渣尽量除去丙酮。
⑦_________________________________;在沸水浴中加热15分钟。放置,冷却,抽滤至干,留滤液。并将此操作重复进行一次。将两次滤液合并,为提取物Ⅰ。
⑧_________________________________,加热到70 ℃,保温20分钟(恒温水浴)后抽滤,留滤液(提取物二)。
(2)用二苯胺法和苔黑酚法来检验提取物Ⅰ和提取物Ⅱ,请预测现象。
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