（2013•开封二模）一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按图甲程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草

Question

（2013•开封二模）一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按图甲程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释10³稀释度．各取0.1mL已稀释10 ³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为______．
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是______．
（3）接种技术的核心是______．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步______，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是______或有氧条件抑制了这些细菌的生长．
（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是______，有透明带菌落利用的氮源主要是______，据此可筛选出目的菌．实验结果如图乙显示的A～E五种菌株中，______是最理想菌株．
（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物质甲，能生长
B	不生长	添加营养物质乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的原因是______．突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是______．

Answer 1

（1）图中稀释的倍数是10⁸，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷1×10⁸=5.6×10⁹个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6×10⁹×10³=5.6×10¹²个．
（2）该除草剂为含氮有机物，为了选育能降解该除草剂的细菌，应采用唯一氮源的选择培养基，即无氮的固体培养基中添加该除草剂．
（3）接种技术的核心是无菌操作，防止杂菌污染，保证培养物的纯度．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长，原因是培养基缺少这些细菌可利用的氮源．
（4）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；而出现透明带说明除草剂被分解，菌落是分解该除草剂的细菌，氮源是该除草剂；E透明圈最大，故是最理想菌株．
（5）根据题意突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而将A+B就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲．
故答案为：
（1）5.6×10¹²
（2）在无氮的培养基中添加该除草剂
（3）防止杂菌污染，保证培养物的纯度   稀释获得单个菌落   培养基缺少这些细菌可利用的氮源 
（4）氮气    该除草剂   E
（5）突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶   突变株A生长需要的营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要的营养物质乙，突变株A可以提供