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凝胶层析法分离混合样品时怎样才能得到较好的分离效果
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凝胶层析法分离混合样品时怎样才能得到较好的分离效果
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答案和解析
要看你样品是什么类型的?混合样品差异有多大?
我在做分离蛋白质,用的凝胶,自己装柱,很难装的,柱效也很差.
就本人经验而言,最重要的是
A 柱子要细,要长,越细越长越好,当然流速会变慢,时间会长,所以因需要而异
B 缓冲液一定要选好,常用的有磷酸,Tris-Hcl,Tris-甘氨酸,醋酸等.最开始我就因缓冲液没选对,浪费了不少东西.
C 流速,凝胶层析,流速一般不是很快,所以要有耐心,一般0.5-1ml/min,但也不能太慢,因为太慢会有扩散现象,峰会很宽.
D 注意柱压,太大的话,填料会塌陷,一切就都毁了.
祝你成功
我在做分离蛋白质,用的凝胶,自己装柱,很难装的,柱效也很差.
就本人经验而言,最重要的是
A 柱子要细,要长,越细越长越好,当然流速会变慢,时间会长,所以因需要而异
B 缓冲液一定要选好,常用的有磷酸,Tris-Hcl,Tris-甘氨酸,醋酸等.最开始我就因缓冲液没选对,浪费了不少东西.
C 流速,凝胶层析,流速一般不是很快,所以要有耐心,一般0.5-1ml/min,但也不能太慢,因为太慢会有扩散现象,峰会很宽.
D 注意柱压,太大的话,填料会塌陷,一切就都毁了.
祝你成功
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