确定血清白蛋白纯度和生物活性鉴定方法并且确定所用试剂仪器,

Question

确定血清白蛋白纯度和生物活性鉴定方法 并且确定所用试剂仪器,

Answer 1

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量
一、 标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所 测物质的含量.因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术.
二、 蛋白质含量测定方法 1、 凯氏定氮法 2、 双缩脲法 3、 Folin-酚试剂法 4、 紫外吸收法 5、 考马斯亮蓝法 三、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂：1、 考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,雍 蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤.最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—2 50,4.7%（W/V）乙醇,8.5%（W/V）H3PO4.2、 标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度同0.15 mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液.（二）、器材：1、722S型分光光度计使用及原理（）.2、移液管使用（）.（三）、标准曲线制作：试管编号 0 1 2 3 4 5 6 100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5 5 5 5 5 5 摇匀,1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色 A595nm
2、以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug）,在坐标轴上绘制标准曲线.1）、利用标准曲线查出回归方程.2）、用公式计算回归方程.3）、或用origin作图 ,测出回归线性方程.即A595nm=a×X( )+6 一般相关系数应过0.999以上,至少2个9以上.4）、绘图时近两使点在一条直线上,在直线上的点应该在直线两侧.（四）、蛋白质含量的测定：样品即所测蛋白质含量样品（含量应处理在所测范围内）,依照操作步骤1操作,测出样品的A595nm,然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量.一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间,所以上述样品如果A595nm值太 大,可以稀释后再测A595nm值,然后再计算.（五）、注意事项：1、 玻璃仪器要洗涤干净.2、 取量要准确.3、 玻璃仪器要干燥,避免温度变化.4、 对照：用被测物质以外的物质作空白对照.