肺细胞中的lf4一右基因表达减弱，癌基因nAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将lf4一右基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术

Question

肺细胞中的lf4一右基因表达减弱，癌基因nAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将lf4一右基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图1．

（1）进行过程①时，需用______酶切开载体以插入lf4一右基因．进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁u的细胞，以利于细胞培养．采用PCn技术扩增lf4一右基因时，在PCn反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水，4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论u为______．
（2）研究发现，lf4一右基因能影响癌基因nAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测1f4一右基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______（nASmnNA/nAS蛋白质）含量减少引起的．
（3）现有一长度为1000碱基对（bp）的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为______．
（4）某线性DNA分子分别用限制酶HindⅢ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段（一b为千五碱基对）：

限制酶	片段及长度
HindⅢ	2.5一b，5.0一b
Sma I	2.0一b，5.5一b
Hind 1Ⅲ和Sma I	2.5一b，3.0一b，2.0一b

可以推知限制酶HindⅢ和Sma I在此DNA分子中分别有______五识别序列．两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶fcon I处理，结果导致凝胶u3.0一b的片段消失，产生一种1.5一b的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和fcon I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为______的片段．

Answer 1

（m）基因工程2用到的基因剪刀是限制性核酸内切酶．要将组织细胞分散开需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理．目的基因扩增了5代，共得到42个2NA分子，除了含有模板2NA链的m个2NA分子外，其余的2NA分子都含有引物I，因此占4...