细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源．现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bg1B基因）与图1的质粒重组并导入大肠杆菌获得

Question

细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源．现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bg1B基因）与图1的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶．（质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同）
（1）从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bg1B基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是 ___．
（2）为避免自身环化并确保bg1B基因与图1质粒准确重组，

可选用的限制酶是 ___
A．NdeI和XbaI
B．NbaI和BamHI
C．XbaI
D．PstI
E．BamHI
（3）bg1B基因通过 ___酶与质粒结合形成重组质粒．
（4）图2培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图3．据此分析，图2中 ___菌落即为纤维素酶产量最高的菌株．
（5）在PCR扩增bg1B基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率．与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bg1B基因的效率更高，其原因是在PCR过程中 ___（多选）
A．仅针对bg1B基因进行诱变
B．bg1B基因产生 了定向突变
C．bg1B基因可快速积累突变
D．bg1B基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变．

Answer 1

（1）获取目的基因的方法主要有两种：一是从供体细胞的DNA中直接分离基因，而是人工合成基因．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，通过逆转录法进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法...