科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图1：（1）步骤①的技术名称是．（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有

Question

科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图1：

（1）步骤①的技术名称是___．
（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有___．
（3）步骤③中，需要构建含有干扰素基因的___．由于DNA复制时，子链只能由5′向3′方向延伸，故构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2A、B、C、D四种单链DNA片段中选取___作为引物．对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为___或___．
（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用___的方法．

Answer 1

（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性．
（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；DNA复制只能从5’到3’，因此构建前利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C作为引物．由图可知，SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．
（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因，但不会破坏绿色荧光蛋白基因，因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导．为检测干扰素基因是否表达，可以采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）细胞核
（2）ES细胞具有全能性
（3）基因表达载体   B和C    HindⅢ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ
（4）绿   抗原-抗体杂交