逆转录PCR和实时PCR,即reversetranscriptionPCR和realtimePCR,二者缩写简称都是RT-PCR,这两个概念有什么异同吗?

Question

逆转录PCR和实时PCR,即reverse transcription PCR和real time PCR,二者缩写简称都是RT-PCR,这两个概念有什么异同吗?

Answer 1

逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.
由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成.随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的PCR.原先的RNA模板被RNA酶 H降解,留下互补DNA.
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术,可以检测很低拷贝数的RNA.RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断,并且可以用于定量监测某种RNA的含量.（检测基因表达的方法,参见Northern Blot法.）
RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR).为了与逆转录PCR相区别,通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR).
实时PCR(real-time PCR),属于定量PCR（Q-PCR）的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析.
real time PCR 的定量使用萤光色素,目前有二种方法.一种是在ds DNA中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种萤光探针（probe）.
real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合,能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因.这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）”