细菌学检验中生长抑制试验（GIT）的概念

Question

细菌学检验 中生长抑制试验（GIT）的概念

Answer 1

其实原理还是比较简单的：利用活细胞线粒体脱氢酶能将 MTT 盐还原成蓝紫色的甲瓒颗粒,以颗粒溶解后呈现的颜色深浅反映细胞活性.
【操作步骤】
1.将细胞以 4 .0×10 8 /L 密度接种于用 96 孔培养板中,每孔 100 μL ,37℃ 、 5%CO 2 孵箱中培养 至细胞贴壁,加入长春新碱,使之终浓度分别为 0 、 0.1 、 1 、 10 、 100 、 200 μg /mL ,每一浓度重复 5 孔 .
2.37℃ 、 5%CO 2 孵箱中培养 20h ,每孔加入 MTT20 μL,继续培养 4h .
3.吸弃培养基,用无血清培养基洗 1 次,加入 MTT 裂解液 100μL ,37℃ 、 5% CO 2 孵箱中孵育 8h .
4 ．紫色结晶完全溶解后,用 酶标仪检测各组细胞的 A 570nm / A 450nm 吸光值,以 A 570nm / A 450nm 代表细胞活力,并以 0 μmol /L 药物作为对照组,其细胞存活率为 100% ,其余各组按：存活率 = （各浓度组吸光值 / 对照组吸光值） ×100% 与之比较
主要是配置好PBS营养液以及准备好紫外线酶标仪器.