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DEAE-葡聚糖介导的转染步骤谁能介绍下?
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DEAE-葡聚糖介导的转染步骤谁能介绍下?
▼优质解答
答案和解析
1.接种鼠L成纤维细胞浓度为5×105CO2 /孔/皿生长2～3天,当达50%板底面积可用.
2.乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒DNA,空气干燥后溶于40μL的TE中,或取供体DNA.
3.用10ml 1×PBS、4mL、10%富合生长因子血清的DMEM洗板(皿).
4.在80μl热的10g/L DEAE-葡聚糖中缓慢加入DNA,取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)细胞中,使其分布均匀轻轻转动直到显示均匀一致的红色,培养4小时.
5.从孔(皿)中吸出DNA/DEAE-葡聚糖,加入5mL 10%DMSD,室温放置1分钟,吸出DMSO,用5mL 1×PBS洗一次吸出,加入10mL培养液(10%血清的DMEM).
6.培养细胞,在适当时间分析细胞,若含有抗药基因,可用G418选择培养液培养.
2.乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒DNA,空气干燥后溶于40μL的TE中,或取供体DNA.
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4.在80μl热的10g/L DEAE-葡聚糖中缓慢加入DNA,取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)细胞中,使其分布均匀轻轻转动直到显示均匀一致的红色,培养4小时.
5.从孔(皿)中吸出DNA/DEAE-葡聚糖,加入5mL 10%DMSD,室温放置1分钟,吸出DMSO,用5mL 1×PBS洗一次吸出,加入10mL培养液(10%血清的DMEM).
6.培养细胞,在适当时间分析细胞,若含有抗药基因,可用G418选择培养液培养.
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