搜索了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题,还是有很多问题大家没有详细和标准的说明,现有几个具体问题,1.明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶,

Question

搜索了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题,还是有很多问题大家没有详细和标准的说明,现有几个具体问题,1.明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶,很大一瓶的那种,能不能用于细胞培养?难道一定要用GIBCO 20ML即用型的?2.明胶使用浓度的问题:有说0.1%,1%和2%的,我养的是内皮细胞,应该用哪种浓度呢?3.明胶消毒的问题:有人说可以高温高压灭菌,有人说应该要过滤.还有人说要先高压再乘热过滤?到底要怎样?4.明胶包被培养瓶的问题:有人说包被后置培养箱过夜,用时在弃溶掉的,加PBS和培养液 冲洗.也有人说包被后吹干30min-60min .再加培养液冲洗即可用,到底怎么个做法啊5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题:包被后的培养瓶能够用多久呢?有文献说包被7天,干2-3天后放4度保存可以在两周内使用.

Answer 1

博凌科为Q1.明胶溶液配置的问题A1: 用去離子水來配即可.國產的行不行要去試驗,保險的就是買進口的.其實通常是買Sigma的gelatin粉末來配就好了,不用買配好現成的.配好的濃縮 液可分裝放-20度長期保存,即將要用的濃縮液可放4度來備用.Q2.明胶使用浓度的问题A2:1%是濃縮母液的濃度,使用前才取適量稀釋成0.1%來包被.Q3.明胶消毒的问题:A3: Gelatin是用高溫高壓殺菌的, 其他你所說的方法也不是不能用, 只是沒必要.Q4.明胶包被培养瓶的问题A4:通常是包被1小時就夠了,然後吸乾,不需要清洗.因為你配gelatin溶液中並沒有含其他有害的物質, 沖洗只是多了一道沒必要的工作.包被完要清洗是Collagen才需要的.Q5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题A5.這個我不知道,但基本上是越快使用越好.由於包被的過程很快,所以我都是當天包被, 在等的過程中可以去做其他的事,包被即將完成的前20分鐘就開始處理細胞,等細胞收下來包被也就做好了, 馬上就用. 0.1%的明胶适合大多数细胞培养时的包被,在四度放置不会出现凝胶状.我参考的文献说内皮细胞用1％的明胶包被,也就是母液,它在四度放置时会适度凝 结.我的内皮细胞用1％的明胶包被效果我觉得还不错.不管你用包被1小时的方法还是包被4小时的方法,都最好从包被开始到使用的间隔不超过一天,包被的容器放置时间越长越不好.