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在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗?
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在提取RNA的过程中为什么在沸水浴上加热30min?RNA会被破坏吗?
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答案和解析
提取RNA的方法常用稀碱法和浓盐法.前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解
后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜的表明张力,破坏磷酸双酯层.帮助高浓度盐破坏细胞膜,有助于RNA的释放;还可将蛋白质变性,有助于RNA的提取分离.
RNA不会变性啦,PCR反应的温度也几近于沸水温度,只是双链的变性,并没有降解,RNA之间的化学键能承受这样的温度,只是不能停留太久,因为细胞中的磷酸二酯酶和磷酸单酯酶在此温度范围比较活跃,会使RNA降解而降低提取率.
后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来.所以加热的条件是降低细胞膜的表明张力,破坏磷酸双酯层.帮助高浓度盐破坏细胞膜,有助于RNA的释放;还可将蛋白质变性,有助于RNA的提取分离.
RNA不会变性啦,PCR反应的温度也几近于沸水温度,只是双链的变性,并没有降解,RNA之间的化学键能承受这样的温度,只是不能停留太久,因为细胞中的磷酸二酯酶和磷酸单酯酶在此温度范围比较活跃,会使RNA降解而降低提取率.
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