Ni柱亲和层析的具体操作?Ni柱亲和层析的具体操作,我用的是Ni-NTA柱,为什么我的蛋白结合不上去呢?

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Ni柱亲和层析的具体操作?
Ni柱亲和层析的具体操作,我用的是Ni-NTA柱,为什么我的蛋白结合不上去呢?

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答案和解析

Ni柱填料一般有两种,NTA和IDA亲和柱,你这个大小的蛋白1ml填料理想状况可以吸附20mg以上,最多2ml填料不就够了 .这种柱子一般不用大体积,一般装柱都是1-2ml填料,我也用过5-10ml填料的,按比例使用同等条件洗脱效果比小体积的柱子要差很多.纯化是纯度和效率的矛盾,你需要什么样的纯度,需要多大量,我对你的实验并不熟悉,只能告诉你,理论上每ml填料可以结合你的蛋白大约20-30mg（质量好的填料）,这种量还是比较可观的,做小鼠的动物实验都足够了.
我自己制备1g纯蛋白都是用2ml填料纯化的
国产填料主要是基质合成比较差,如果其基质是进口的,那和进口填料也差不多,就是质量不稳定而已
我不知道你指什么两种,NTA只是一种化学物质－氮川三乙酸,所以我不认为这个填料有什么两种,最多偶联基质和方式不同而已,功能基团是一样的,不一样的功能团就不会叫这个名字,除非你指的是IDA,IDA已经慢慢地被淘汰了,详细的就不多说了

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