乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，它不仅参与铁的转运，而且有调节免疫的功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物，同时还是极具开发潜力的食品和饲料添加剂．科研

Question

乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，它不仅参与铁的转运，而且有调节免疫的功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物，同时还是极具开发潜力的食品和饲料添加剂．科研工作者利用基因工程将人乳铁蛋白基因导入牛的受精卵中，从牛分泌的乳汁中提取乳铁蛋白．请回答下列问题：
（1）将人的乳铁蛋白基因导入牛的受精卵之前，需先构建基因表达载体，这一过程需要的工具有___酶、___酶和运载体，基因表达载体上的位于基因首端的启动子是___酶识别和结合的部位．
（2）所使用的受精卵的性染色体组成是___．将基因表达载体导入受精卵常用的方法是___．
（3）将基因表达载体导入牛受精卵，经检测后需要进行早期胚胎培养，所用的培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和___等物质．通常培养到___时期的胚胎可以进行胚胎移植．
（4）欲在较短时间内培育出大量的能生产人乳铁蛋白的牛，可利用上述转基因牛的乳腺细胞，通过___技术来实现．乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，它不仅参与铁的转运，而且有调节免疫的功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物，同时还是极具开发潜力的食品和饲料添加剂．科研工作者利用基因工程将人乳铁蛋白基因导入牛的受精卵中，从牛分泌的乳汁中提取乳铁蛋白．请回答下列问题：
（1）将人的乳铁蛋白基因导入牛的受精卵之前，需先构建基因表达载体，这一过程需要的工具有___酶、___酶和运载体，基因表达载体上的位于基因首端的启动子是___酶识别和结合的部位．
（2）所使用的受精卵的性染色体组成是___．将基因表达载体导入受精卵常用的方法是___．
（3）将基因表达载体导入牛受精卵，经检测后需要进行早期胚胎培养，所用的培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和___等物质．通常培养到___时期的胚胎可以进行胚胎移植．
（4）欲在较短时间内培育出大量的能生产人乳铁蛋白的牛，可利用上述转基因牛的乳腺细胞，通过___技术来实现．

Answer 1

（1）构建基因表达时，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能启动转录过程．
（2）由于只有母牛才能产生乳汁，因此要能从牛分泌的乳汁中提取乳铁蛋白，所使用的受精卵的性染色体组成是XX．将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（3）早期胚胎培养时，所用的培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和动物血清等物质．胚胎移植时，通常选择培养到桑椹胚或囊胚时期的胚胎．
（4）欲在较短时间内培育出大量的能生产人乳铁蛋白的牛，可利用上述转基因牛的乳腺细胞，通过动物体细胞核移植（或克隆）技术来实现．
故答案为：
（1）限制（或限制性核酸内切）      DNA连接      RNA聚合
（2）XX       显微注射法
（3）动物血清       桑椹胚或囊胚
（4）动物体细胞核移植（或克隆）