如何将两个外源基因导入到一个质粒载体?有一段平末端编码人VEGF基因的DNA片段,怎样将其插入到含有EcoRI和BamH I限制位点的PET28a载体中去?插入后重组载体转化大肠杆菌DH5.我们要插入这个外源

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如何将两个外源基因导入到一个质粒载体?
有一段平末端编码人VEGF基因的DNA片段,怎样将其插入到含有EcoRI和BamH I限制位点的PET28a载体中去?插入后重组载体转化大肠杆菌DH5.
我们要插入这个外源基因,还要插入一个抗性基因来鉴定该片段已插入载体中,但是该质粒只有2个限制位点,插入VEGF基因时已经用了,那抗性基因怎么插入呢?如果还是用这两个限制位点的话,插入抗性基因时就会有可能导致VEGF基因被切除了.

▼优质解答

答案和解析

我用过这个载体,这个载体上本身就有一个抗性基因,它是抗卡纳的载体,我当时用的是BamHI和HindIII切的,你可以查一下这个载体的图谱,EcorI和BamHI应该没有切开这个抗性基因.如果这个抗性基因真的被切开了,那就只能插入抗性基因了,不过做双突变载体的构建成功率比较低,我建议你可以试试看一下有没有其他的酶切位点可以把你的目的基因插入到这个载体中,如果一定要做双突变就只能查该载体中的另外两个酶切位点,而且这两个酶切位点在目的基因中不存在,如果不能满足这些条件,就不能完成双基因插入的载体构建了.

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