2016年9月研究人员发现，从锥形蜗牛体内提取出的毒液有望帮助人类开发出超级速效的胰岛素．回答下列问题：（1）科研人员尝试利用基因工程制造锥形蜗牛毒蛋白．在基因工程中，质粒载

Question

2016年9月研究人员发现，从锥形蜗牛体内提取出的毒液有望帮助人类开发出超级速效的胰岛素．回答下列问题：
（1）科研人员尝试利用基因工程制造锥形蜗牛毒蛋白．在基因工程中，质粒载体作为某因工程的工具，应具有的基本条件是___（答出两点即可）；而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还须具有目的基因、启动子和终止子．基因工程中既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端的是___酶．
（2）为了获得目的基因可以通过提取分析锥形蜗牛毒蛋白中的___序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，在用PCR技术大量扩增目的基因．在用PCR技术扩增DNA时，目的基因DNA受热变性后解链为单链，___与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行___，如此循环多次．
（3）将人工合成的目的基因导入大肠杆菌体内，一般需要先用___处理大肠杆菌使之成为感受态细胞．经过目的基因的检测和表达，获得的锥形蜗牛毒蛋白活性未能达到期待的“速效胰岛素”的生物活性，导致这种差异的原因可能是___．

Answer 1

（1）在基因工程中，质粒载体作为某因工程的工具，应具有的基本条件是能够自我复制、具有标记基因、具有一至多个限制酶切割位点；基因工程中，T₄DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端．
（2）为了获得目的基因可以通过提取分析锥形蜗牛毒蛋白中的氨基酸序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，在用PCR技术大量扩增目的基因．在用PCR技术扩增DNA时，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此循环多次．
（3）将目的基因导入微生物细胞中一般采用钙离子转化法，即用Ca²⁺处理大肠杆菌使之成为感受态细胞．由于大肠杆菌属于原核生物，原核细胞中没有内质网和高尔基体，因此基因表达获得的蛋白质未经内质网和高尔基体的加工不具有期待的生物学活性．
故答案为：
（1）能够自我复制、具有标记基因、具有一至多个限制酶切割位点       T₄DNA连接
（2）氨基酸   引物  延伸
（3）Ca²⁺大肠杆菌中基因表达获得的蛋白质未经内质网和高尔基体的加工