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(2012•宝山区二模)发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境
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(2012•宝山区二模)发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.
实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境影响到发光细菌代谢时,发光会立即受到抑制,且抑制程度与影响物质浓度大小呈相关关系.
实验材料:明亮发光杆菌(海水细菌)、待测海水水样、2%的NaCl溶液、3%NaCl溶液、生物毒性测试仪(用于测定细菌发光强度)、全温振荡器、试管等.
Ⅰ.发光细菌的培养
发光细菌可以直接从海水中和海鱼的体表和内脏中分离,所采用的培养基成分为:胰蛋白胨0.5%,酵母膏0.5%,甘油0.3%,KH2PO40.1%,Na2HPO40.5%,NaCI3%,琼脂2%,pH6.5.
(1)发光细菌为______(自养型/异养型).取海鱼内脏放入灭菌培养皿中20℃培养12-18小时,在暗室中寻找发光点,用______刮取少许菌苔,在______培养基中采用______法获得纯化的发光菌株.使用前接种到______培养基中20℃下振荡培养10-12小时,增殖后用磷酸缓冲液稀释后备用.
Ⅱ.海水中重金属污染程度测定
a、配制发光菌悬液;
b、抑光反应:按照下表配置海水样品稀释液;
表1海水中重金属污染程度测定
(2)表1中1号试管的作用是______.
(3)请在表格中填写适当的数据.
(4)利用生物毒性测试仪测定各试管的______(测定指标).
Ⅲ.五氯酚钠毒性测定
资料:五氯酚钠在水中以五氯苯酚阴离子和五氯苯酚分子平衡存在;五氯苯酚比五氯酚钠的极性小得多,更容易通过生物膜而与细菌细胞相接触.实验温度25℃下,pH为6.0、7.0、8.0、9.0时,pH每升高1个单位,分子态五氯苯酚所占的比例就下降一个数量级.
a、将五氯酚钠配成5个左右浓度等级,将接种后12h的菌液1-2mL用20-30mL3%NaCl溶液稀释混合,磁力搅拌10min 后,取0.2mL加入比色管中,上下振荡5次,去塞,静置15min后用生物毒性测试仪测定发光强度.
b、计算相对发光率
相对发光率(RL)=测试管发光量mV/对照管发光量mV×100%
计算对应相对发光率减小50%的物质浓度(EC50)
c.不同pH条件下,五氯酚钠毒性测定
发光细菌适宜生存的pH值为6.0-9.0
表2 不同pΗ 值下五氯酚钠毒性测定结果/㎎•L-1
(5)表2的结果与结论______.
(6)据资料分析可能的原因:______.
实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境影响到发光细菌代谢时,发光会立即受到抑制,且抑制程度与影响物质浓度大小呈相关关系.
实验材料:明亮发光杆菌(海水细菌)、待测海水水样、2%的NaCl溶液、3%NaCl溶液、生物毒性测试仪(用于测定细菌发光强度)、全温振荡器、试管等.
Ⅰ.发光细菌的培养
发光细菌可以直接从海水中和海鱼的体表和内脏中分离,所采用的培养基成分为:胰蛋白胨0.5%,酵母膏0.5%,甘油0.3%,KH2PO40.1%,Na2HPO40.5%,NaCI3%,琼脂2%,pH6.5.
(1)发光细菌为______(自养型/异养型).取海鱼内脏放入灭菌培养皿中20℃培养12-18小时,在暗室中寻找发光点,用______刮取少许菌苔,在______培养基中采用______法获得纯化的发光菌株.使用前接种到______培养基中20℃下振荡培养10-12小时,增殖后用磷酸缓冲液稀释后备用.
Ⅱ.海水中重金属污染程度测定
a、配制发光菌悬液;
b、抑光反应:按照下表配置海水样品稀释液;
表1海水中重金属污染程度测定
试管编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
3%NaCl溶液(mL) | 4.74 | 4.49 | 4.24 | 3.99 | |
海水样品(mL) | 0.25 | 0.50 | 0.75 | 1.00 | |
发光菌悬液(mL) | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | |
混合液中海水浓度(%) | 0.05 | 0.10 | 0.15 | 0.20 |
(3)请在表格中填写适当的数据.
(4)利用生物毒性测试仪测定各试管的______(测定指标).
Ⅲ.五氯酚钠毒性测定
资料:五氯酚钠在水中以五氯苯酚阴离子和五氯苯酚分子平衡存在;五氯苯酚比五氯酚钠的极性小得多,更容易通过生物膜而与细菌细胞相接触.实验温度25℃下,pH为6.0、7.0、8.0、9.0时,pH每升高1个单位,分子态五氯苯酚所占的比例就下降一个数量级.
a、将五氯酚钠配成5个左右浓度等级,将接种后12h的菌液1-2mL用20-30mL3%NaCl溶液稀释混合,磁力搅拌10min 后,取0.2mL加入比色管中,上下振荡5次,去塞,静置15min后用生物毒性测试仪测定发光强度.
b、计算相对发光率
相对发光率(RL)=测试管发光量mV/对照管发光量mV×100%
计算对应相对发光率减小50%的物质浓度(EC50)
c.不同pH条件下,五氯酚钠毒性测定
发光细菌适宜生存的pH值为6.0-9.0
表2 不同pΗ 值下五氯酚钠毒性测定结果/㎎•L-1
pΗ | 6.0 | 7.0 | 8.0 | 9.0 |
EC50值 | 1.74 | 2.41 | 9.39 | 15.94 |
(6)据资料分析可能的原因:______.
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答案和解析
(1)发光细菌的代谢方式为异养型,接种时可用接种环接种到固体培养基上,通过平板划线法获得纯化的菌株;然后利用液体培养基进行扩大培养.(2)据实验设计可知,表1中1号试管应为对照组,起对照作用.(3)根据对...
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