图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题．（1）基因工程中最常用的载体是，而作为基因表达载体，除图1

Question

图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题．

（1）基因工程中最常用的载体是___，而作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有___．
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是___．若将基因表达载体导入大肠杆菌，一般用___处理，使其处于___，以利于吸收周围环境中的DNA分子．
（3）为了筛选含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加___，培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物组成为图2中___．

Answer 1

（1）基因工程中常用的运载体是质粒、动植物病毒和噬菌体，其中最常用的载体是质粒；基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等．
（2）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca²⁺处理，使其处于感受态，以利于吸收周围环境中的DNA分子．
（3）了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．
故答案为：
（1）质粒       目的基因和终止子
（2）BclI和HindⅢCa²⁺感受态
（3）四环素       引物甲和引物丙