2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的萤光就可以跟踪蛋白质在细胞内

Question

2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的萤光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒．限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来___，理由是：___．
（2）限制性内切酶的作用于DNA分子的___，除限制酶外还需要的工具酶是___．
（3）重组质粒中除目的基因外还需含有的成分为___（至少回答三个，）．
（4）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是___．
（5）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是___．
（6）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：___（用数字表示）．①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白．

Answer 1

（1）①限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，则图2中被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端为：、．
②酶Ⅰ和酶Ⅱ识别序列不同，但切割后产生的黏性末端相同，因此在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接．
（2）制性内切酶的作用于DNA分子的磷酸二酯键，除限制酶外还需要的工具酶是DNA连接酶．
（3）基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因、标记基因和复制原点等．
（4）将重组质粒导入动物细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射法．
（5）标记基因的作用是鉴定受体细胞中是否含有目的基因．
（6）蛋白质工程的操作过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）→基因表达合成相应的蛋白质．因此采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④．
故答案为：
（1）可以连接      因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）
（2）磷酸二酯键     DNA连接酶
（3）复制起始点、标记基因、启动子、终止子（任答三个）
（4）显微注射技术
（5）为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因
（6）②①③④