查耳酮合成酶（CHS）是黄酮类化合物合成的关键酶．图中是将CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮类化合物苦荞的过程．请回答：（1）构建含CHS基因的重组织粒时，应选用限制酶，对进行切

Question

查耳酮合成酶（CHS）是黄酮类化合物合成的关键酶．图中是将CHS基因导入苦荞，培育高产黄酮类化合物苦荞的过程．请回答：

（1）构建含CHS基因的重组织粒时，应选用限制酶___，对___进行切割．
（2）若现有两端为平末端的CHS基因，需在其两末端连接上___（填碱基序列），再用___酶将它与EooR I（识别序列和切割位点是-G AATC-）切割过的质粒连接得到重组织粒．
（3）欲利用含卡那霉素（抑制普通苦荞愈伤组织生长）的培养基筛选已导入CHS基因的苦荞细胞，应在构建重组织质粒是接入___作为标记基因，图中所示的基因导入苦荞细胞的方法为___．
（4）图中②过程为___，它利用培养基需含有一定的营养物质和___，时伤愈组织在___（填图中标号阶段分化成胚状体或丛芽）
（5）判断转基因苦荞培育是否成功，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的___含量，也可测定细胞中CHS的含量，苦荞体细胞能培养成完整植株的根本原因是___．

Answer 1

（1）过程①是基因表达载体的构建，质粒和目的基因上都含有PstⅠ、SmaⅠ和EcoRⅠ的作用位点，但是SmaⅠ在目的基因内部，因此需要用PstⅠ和EcoRⅠ将DNA片段和质粒进行切割．
（2）由题意知，EooR I识别序列和切割位点是-G AATC-，如果CHS基因的末端是平末端，需在其两末端连接上-GAATC、-CTTAG-再用DNA连接酶将它与EooR I切割过的质粒连接得到重组织粒．
（3）利用含卡那霉素（抑制普通苦荞愈伤组织生长）的培养基筛选已导入CHS基因的苦荞细胞，应在构建重组织质粒是接入卡那霉素基因作为标记基因；图中所示的基因导入苦荞细胞的方法为农杆菌转化法．
（4）图中②过程是脱分化形成愈伤组织的过程；③是再分化过程；植物组织培养利用的培养基需含有一定的营养物质和植物激素；愈伤组织经过再分化形成胚状体或从芽．
（5）断转基因苦荞培育是否成功，可以比较转基因苦荞与普通苦荞的黄酮类化合物的含量或细胞中CHS的含量；苦荞体细胞能培养成植株的根本原因是植物细胞的全能性即细胞中含有发育成完整个体所必需的全部基因．
故答案为：
（1）PstⅠ和EcoRⅠ质粒和DNA片段
（2）-GAATC-、-CTTAG-DNA连接
（3）卡那霉素基因  农杆菌转化法
（4）脱分化   植物激素   ③
（5）黄酮类化合物   植物细胞具有全能性