自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生PHB（一种可以被生物降解的塑料）．现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、

Question

自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生PHB（一种可以被生物降解的塑料）．现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选PHB固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用．回答下列问题：
（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加___．培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是___．
（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板．此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的___．倒平板时，要待高压灭菌后的培养基___，再在___附近操作．平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是___．
（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落．经染色鉴定，其中3种能产生PHB．那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢？请说出你的实验思路．___．

Answer 1

（1）自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，因此富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加含氮物质（氮源）．培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是为细菌的生长提供充足的氧气．
（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板．此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，为固体培养基，因此培养皿中需添加了一定量的琼脂．倒平板时，要待高压灭菌后的培养基 冷却至50℃左右（或冷却至不烫手），再在酒精灯火焰附近操作．平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是选出没被微生物污染的平板．
（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落．经染色鉴定，其中3种能产生PHB．进一步筛选出高产PHB的菌种的实验思路为：将能产生PHB的三种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同时间，检测和比较三种菌的PHB生成量．
故答案为：
（1）含氮物质（氮源）       为细菌的生长提供充足的氧气
（2）琼脂   冷却至50℃左右（或冷却至不烫手）     酒精灯火焰     选出没被微生物污染的平板
（3）将能产生PHB的三种菌分别接种到相同的培养基上，在相同且适宜的条件下培养相同时间，检测和比较三种菌的PHB生成量