水稻纹枯病是一种真菌性病害，在我国长江流域和南方的一些省区居水稻病害之首．土壤中某些拮抗微生物与水稻纹枯菌共培养时会形成抑菌圈，为水稻纹枯病生物防治提供了重要依据．科

Question

水稻纹枯病是一种真菌性病害，在我国长江流域和南方的一些省区居水稻病害之首．土壤中某些拮抗微生物与水稻纹枯菌共培养时会形成抑菌圈，为水稻纹枯病生物防治提供了重要依据．科研人员进行了以下研究，请回答相关问题：
（1）筛选菌株
水稻纹枯菌的拮抗微生物可从水稻田采集水稻组织或___进行筛选，将所取样品每份称取5g放入液体培养基中培养24h后，取适量培养液涂布于琼脂平板上，培养5天后，挑选形态不同的___，对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，培养3天后，观察纹枯菌的生长，根据___选出某理想菌株，编号为T4．
（2）鉴定菌株T4所属的细菌类型
提取菌株T4基因组DNA，扩增其16S rDNA（能体现不同菌属之间的差异，长度接近1000个碱基对）．已知PCR扩增过程中，耐高温的DNA聚合酶合成子链的效率约为每分钟形成1000个磷酸二酯键，则对PCR扩增仪进行程序设定时，应将每轮循环的延伸时间定为___，对扩增产物___后确定该菌株所属细菌类型．
（3）探究菌株T4的生长和抑菌活性物质产生的最适条件
研究小组将菌株T4的单菌落接种至液体培养基中，振荡培养，分别于不同起始 pH、不同培养温度下测定细菌的生长量和抑菌效果，其中细菌生长量测定采用分光光度法，吸光度（OD值）和样本溶液浓度成正比．本实验于波长为640nm处记录菌液的吸光度（OD₆₄₀），得到如下曲线：

由图可知，菌株的最适生长条件为：___，与其抑菌活性物质产生的最适条件___．（一致/不一致）
（4）菌种保存
为了长期保存菌株T4，可在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后___处理，再将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，放在冷冻箱中长期保存．

Answer 1

（1）水稻纹枯菌的拮抗微生物可从水稻田采集水稻组织或土壤进行筛选．单菌落是由一个并且是一种细菌增殖而来，因此培养基培养5天后，挑选形态不同的单菌落，对其进行编号．然后挑取少许菌株分别接种于长满水稻纹枯菌的琼脂平板上，抑菌圈越大说明该微生物抑制纹枯菌的能力越强，因此可以根据抑菌圈的大小选出某理想菌株．
（2）分析题意可知，16SrDNA的长度接近1000个碱基对，而耐高温的DNA聚合酶合成子链的效率约为每分钟形成1000个磷酸二酯键，即接近16SrDNA的长度，因此对PCR扩增仪进行程序设定时，应将每轮循环的延伸时间定为1min，对扩增产物测序后确定该菌株所属细菌类型．
（3）根据题意可知，“吸光度（OD值）和样本溶液浓度成正比”，曲线中看出起始pH7.0，培养温度32℃时吸光度最大，因此该条件为菌株的最适生长条件，而其抑菌活性物质产生的最适条件为PH6.0，培养温度为28℃．
（4）为了长期保存菌株T4，可在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌处理，再将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，放在冷冻箱中长期保存．
故答案为：
（1）土壤   单菌落   抑菌圈的大小
（2）1min   测序
（3）起始pH 7.0，培养温度32℃不一致
（4）灭菌