测序引物选择我想问一下,如果设计的前引物起始位点在186bp,后引物终止位点在781bp,我要是想测这对引物扩出来的DNA序列,再不设计新引物的情况下选择前引物测序好还是后引物测序好,为什么?

Question

测序引物选择
我想问一下,如果设计的前引物起始位点在186bp,后引物终止位点在781bp,我要是想测这对引物扩出来的DNA序列,再不设计新引物的情况下选择前引物测序好还是后引物测序好,为什么?
单引物测序，送前引物还是后引物有什么要求么？

Answer 1

你用扩增的引物测序的话,最好是双向测序,或者,重新合成引物进行测序会比较好.
测序引物的纯化要求较高,而且引物片段不能大于20多个bp.
因为在引物下游几十个bp左右,测序的结果是不稳定的,往往测不出,需要几十个bp之后才稳定.
你再看看你送的是质粒还是pcr产物,如果是质粒,就可以看看外源片段的上游有什么启动子或者通用的测序序列,一般的测序公司都是有自己设计的较好的通用测序引物,你可以用他们的（不用加钱）.
你参考下这个文章《总结了测序中经常遇到的问题及原因分析,希望对大家有帮助!》